蛋白质免疫印迹法 (Western Blot )

1. 技术定义

蛋白质印迹法（WB）是通过特异性抗体检测样本中目标蛋白质的经典分子生物学技术。

2.  原理

    样本中蛋白质经SDS-PAGE凝胶电泳分离→转印至硝酸纤维素膜/聚偏氟乙烯膜（PVDF膜）→封闭膜上非特异性结合位点→一抗特异性结合目标蛋白→二抗（偶联荧光/酶标记）结合一抗→通过化学发光/显色反应检测目标蛋白的表达水平，实现蛋白质的定性与半定量分析。

3.  技术流程

4. 核心应用

蛋白表达验证：验证转录组筛选的差异表达蛋白、基因过表达/干扰后目标蛋白的表达变化。

蛋白修饰检测：检测目标蛋白的磷酸化、乙酰化等翻译后修饰。

抗体特异性验证：验证自制或购买抗体的特异性。

临床样本分析：少量临床样本（如穿刺组织）中目标蛋白的表达分析，辅助疾病诊断与分型。

5. 样本要求