1. 技术定义
免疫组化(Immunohistochemistry,简称IHC)是在组织切片水平上,通过抗原与抗体的特异性结合,结合酶催化底物显色,实现目标蛋白的定位、定性与半定量分析的技术。
2. 原理
组织切片经固定、脱蜡、抗原修复后→封闭非特异性结合位点→一抗特异性结合组织中的目标蛋白→二抗(偶联HRP/DAB或AP/BCIP-NBT)结合一抗→酶催化底物显色(如DAB显色呈棕色,BCIP-NBT显色呈蓝色)→通过显微镜观察目标蛋白在组织中的表达位置(如细胞核、细胞质、细胞膜)与表达强度,适用于组织中蛋白表达的空间分布研究。
3. 技术流程

4. 核心应用
肿瘤病理诊断:检测肿瘤标志物的表达,辅助肿瘤分型、判断肿瘤恶性程度。
疾病机制研究:分析目标蛋白在正常组织与疾病组织中的表达差异、研究蛋白表达与疾病进展的关系。
药物疗效评估:检测药物处理后组织中目标蛋白的表达变化。
临床预后判断:通过IHC检测预后相关蛋白,预测患者预后。
5. 样本要求
样本类型 | 最低用量 | 保存条件 | 质量要求 | 注意事项 |
FFPE组织样本 | 1块蜡块或5张4μm切片 | 室温密封保存 | 组织固定充分,无脱片 | 蜡块需含目标组织区域,切片贴附牢固 |
新鲜冷冻组织样本 | 1块(5mm×5mm×2mm) | 液氮速冻后-80℃冷冻 | 组织结构完整,无坏死、无冰晶损伤 | 冷冻切片温度控制在-20℃,避免组织碎裂 |
动物组织样本 | 1块(如小鼠肝脏/肿瘤) | 4%多聚甲醛固定后石蜡包埋 | 组织取材完整,固定及时 | 取材后30min内固定,避免蛋白降解 |
穿刺组织样本 | 1条穿刺组织(长度≥5mm) | 4%多聚甲醛固定后石蜡包埋 | 组织量足够,无挤压变形 | 固定液体积为组织体积10倍以上 |
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