1. 技术定义
免疫荧光法（Immunofluorescence，简称IF/ICC）是通过抗原与抗体的特异性结合，结合荧光素（如FITC、Cy3、Alexa Fluor系列）标记的二抗，在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察目标蛋白的荧光信号，实现目标蛋白的定位、定性与共定位分析的技术。
IF针对组织切片样本，分析蛋白在组织中的空间分布；ICC针对细胞样本（如细胞爬片），分析蛋白在细胞内的亚细胞定位（如细胞核、细胞质、细胞膜）。该技术可同时检测多种蛋白（多色荧光标记），实现蛋白共定位分析，具有高灵敏度、高特异性的特点。
2. 技术流程
3. 核心应用
亚细胞定位研究：分析目标蛋白在细胞内的具体位置、研究药物处理后蛋白的亚细胞定位变化。
蛋白共定位分析：通过双标/多标荧光，检测两种或多种蛋白是否在同一细胞/组织区域共定位，推测蛋白功能关联。
细胞骨架与结构研究：标记细胞骨架蛋白，观察细胞形态、细胞分裂过程中的骨架变化。
免疫细胞鉴定：标记免疫细胞表面标志物，鉴定免疫细胞亚群，分析免疫细胞在组织中的分布。
4. 样本要求
样本类型 | 最低用量 | 保存条件 | 质量要求 | 注意事项 |
细胞爬片样本 | 1张（6孔板爬片） | 4%多聚甲醛固定后4℃保存 | 细胞密度适中（50%-70%汇合度），无脱落 | 爬片前用多聚赖氨酸包被，增强细胞附着力 |
组织冷冻切片 | 1张（8μm切片） | 液氮速冻后-80℃冷冻 | 组织结构完整，无冰晶损伤，无脱片 | 切片贴附于防脱载玻片，-80℃密封保存 |
FFPE组织切片 | 1张（4μm切片） | 室温密封保存 | 脱蜡彻底，抗原修复充分 | 需进行抗原修复，避免甲醛交联影响抗原性 |
悬浮细胞样本 | 1×105个 | 4%多聚甲醛固定后4℃保存 | 细胞活性≥80%，固定及时 | 固定时间15-20 min，避免过度固定导致荧光淬灭 |
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