数字PCR（Digital PCR）

1. 技术定义

数字PCR（dPCR）是将样本核酸分子随机分配到大量微小反应单元（如微滴、微孔）中，每个反应单元含0-1个目标核酸分子，通过PCR扩增后，根据 “阳性反应单元（有荧光信号）” 与 “阴性反应单元（无荧光信号）” 的数量，结合泊松分布公式计算目标核酸的绝对拷贝数。相比qRT-PCR，dPCR无需标准曲线，具有更高的灵敏度（可检测低至1拷贝/μL）与准确性，适用于低丰度核酸检测、基因拷贝数变异分析等场景。

2. 技术流程

3. 核心应用

低丰度基因检测：肿瘤循环游离DNA（cfDNA）中低频突变检测、胎儿游离DNA无创产前诊断；

基因拷贝数变异分析：检测染色体拷贝数变异（CNV）、转基因生物中外源基因拷贝数定量；

微量样本定量：单细胞中特定基因的绝对拷贝数检测、福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本中低丰度RNA的定量；

qRT-PCR结果验证：验证qRT-PCR无法准确定量的低丰度基因表达，或作为标准品校准qRT-PCR定量结果。

4. 样本要求