1. 技术定义
融合蛋白沉降技术（以GST Pull-down、His Pull-down为代表）是通过重组融合蛋白（“诱饵蛋白”）捕获样本中相互作用蛋白（“猎物蛋白”）的体外蛋白互作检测技术。
GST Pull-down：将目标蛋白与谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合表达，通过谷胱甘肽琼脂糖珠特异性结合GST标签，富集 “GS-诱饵蛋白-猎物蛋白” 复合物；
His Pull-down：将目标蛋白与组氨酸标签（His-tag，如6×His）融合表达，通过镍离子亲和树脂（Ni-NTA）结合His标签，实现复合物富集。该技术可验证体外蛋白互作，或筛选与诱饵蛋白互作的未知蛋白。
2. 技术流程
3. 核心应用
体外蛋白互作验证：验证重组表达的诱饵蛋白与猎物蛋白是否直接相互作用、排除间接互作。
互作结构域分析：构建诱饵蛋白的不同结构域缺失突变体，通过Pull-down确定介导互作的关键结构域。
未知互作蛋白筛选：用融合诱饵蛋白沉降细胞裂解液中的猎物蛋白，结合质谱鉴定未知互作蛋白。
药物筛选辅助：检测药物小分子是否能抑制诱饵蛋白与猎物蛋白的互作。
4. 样本要求
样本类型 | 最低用量 | 保存条件 | 质量要求 | 注意事项 |
重组融合蛋白 | 10μg （纯化后） | -80℃冷冻（分装） | 纯度≥90%，无降解，浓度≥0.5μg/μL | 避免反复冻融，用Pull-down缓冲液溶解 |
细胞裂解液样本 | 2mg总蛋白 | 加裂解液后-80℃冷冻 | 蛋白无降解，无核酸污染 | 裂解液需含蛋白酶抑制剂，离心去除沉淀 |
体外转录翻译产物 | 50μL（含目标蛋白） | -80℃冷冻 | 蛋白表达量高，无明显降解 | 用无细胞表达系统制备，避免宿主蛋白干扰 |
组织裂解液样本 | 5mg总蛋白 | 液氮速冻后裂解，-80℃冷冻 | 蛋白复合物未破坏，无抑制剂 | 用温和裂解液，冰浴裂解，避免高温 |
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