1. 技术定义
酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,简称ELISA)是通过抗原与抗体的特异性结合,结合酶催化底物显色反应,实现抗原或抗体定性与定量检测的技术。根据反应模式分为间接ELISA(检测抗体,如检测血清中病毒抗体)、双抗体夹心法ELISA(检测抗原,如检测细胞因子)、竞争法ELISA(检测小分子抗原,如激素、药物)。
2. 原理
将抗原/抗体固定于固相载体→加入待检样本→抗原抗体结合→加入酶标二抗→酶催化底物显色→通过吸光度值(OD值)计算目标物质浓度,具有高灵敏度(ng/mL-pg/mL级)、高特异性、高通量的特点。
3. 技术流程

4.核心应用
细胞因子检测:定量检测血清、血浆、细胞培养上清中细胞因子的浓度,研究炎症反应、免疫应答机制。
抗体检测:检测血清中特异性抗体,用于疾病诊断、疫苗免疫效果评估。
激素与小分子检测:定量检测血液、尿液中激素、药物小分子的浓度,辅助内分泌疾病诊断、药物代谢研究。
临床样本筛查:高通量筛查临床样本中肿瘤标志物、感染性疾病标志物,用于疾病早期诊断与大规模筛查。
5. 样本要求
样本类型 | 最低用量 | 保存条件 | 质量要求 | 注意事项 |
血清/血浆样本 | 50μL | -80℃冷冻(避免反复冻融) | 无溶血,无微生物污染,无高脂血症 | 血清需彻底凝固,离心去除血块 |
细胞培养上清 | 100μL | -80℃冷冻 | 无细胞碎片,无血清干扰 | 收集后立即1000rpm 离心5min后取上清 |
尿液样本 | 200μL | 加防腐剂后-80℃冷冻 | 离心去除沉淀,pH 7.0左右 | 防腐剂为0.05% NaN3,避免细菌污染 |
组织匀浆样本 | 100μL(蛋白浓度≥0.1μg/μL) | -80℃冷冻 | 匀浆充分,无组织碎片 | 用PBS制备匀浆,离心取上清,避免干扰 |
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