1. 技术定义
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,简称Co-IP)是在IP基础上,检测与目标蛋白存在特异性相互作用的蛋白分子的技术。
2. 原理
样本中目标蛋白(“诱饵蛋白”)与相互作用蛋白(“猎物蛋白”)形成复合物→用诱饵蛋白的特异性一抗富集 “诱饵蛋白 - 猎物蛋白” 复合物→通过WB或质谱检测猎物蛋白,实现蛋白质-蛋白质相互作用的验证与鉴定。相比GST Pull-down(体外互作),Co-IP检测的是细胞内生理性条件下的真实互作,结果更贴近体内实际情况。
3. 技术流程

4. 核心应用
蛋白互作验证:验证已知蛋白间的相互作用、验证候选互作蛋白。
互作蛋白筛选:通过Co-IP富集诱饵蛋白复合物后,结合质谱技术筛选未知的互作蛋白。
互作条件分析:分析不同处理条件对蛋白互作的影响。
信号通路研究:解析信号通路中蛋白复合物的组成、研究蛋白互作在通路激活中的作用。
5. 样本要求
样本类型 | 最低用量 | 保存条件 | 质量要求 | 注意事项 |
组织样本 | 200mg | 液氮速冻后-80℃冷冻 | 蛋白浓度≥2μg/μL,无蛋白酶污染 | 需用温和裂解液,避免破坏蛋白复合物 |
细胞样本 | 2×107个 | 加温和裂解液后-80℃冷冻 | 蛋白复合物完整,无降解 | 裂解液含蛋白酶抑制剂,冰浴裂解30min |
过表达细胞样本 | 5×106个 (转染后48h) | 加裂解液后-80℃冷冻 | 过表达蛋白表达量高,无明显细胞毒性 | 转染效率≥50%,确保诱饵蛋白足量 |
动物组织样本 | 1g (如小鼠肝脏) | 液氮速冻后-80℃冷冻 | 组织新鲜,蛋白复合物未解离 | 取样后立即冷冻,避免复合物解离 |
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