免疫共沉淀(Co-IP)

发布时间:2026-08-04

1. 技术定义

  免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,简称Co-IP)是在IP基础上,检测与目标蛋白存在特异性相互作用的蛋白分子的技术。

 

2. 原理

  样本中目标蛋白(“诱饵蛋白”)与相互作用蛋白(“猎物蛋白”)形成复合物→用诱饵蛋白的特异性一抗富集 “诱饵蛋白 - 猎物蛋白” 复合物→通过WB或质谱检测猎物蛋白,实现蛋白质-蛋白质相互作用的验证与鉴定。相比GST Pull-down(体外互作),Co-IP检测的是细胞内生理性条件下的真实互作,结果更贴近体内实际情况。

 

3. 技术流程

图片5.jpg


4. 核心应用

蛋白互作验证:验证已知蛋白间的相互作用、验证候选互作蛋白。

互作蛋白筛选:通过Co-IP富集诱饵蛋白复合物后,结合质谱技术筛选未知的互作蛋白。

互作条件分析:分析不同处理条件对蛋白互作的影响。

信号通路研究:解析信号通路中蛋白复合物的组成、研究蛋白互作在通路激活中的作用。


5. 样本要求

样本类型

最低用量

保存条件

质量要求

注意事项

组织样本

200mg

液氮速冻后-80℃冷冻

蛋白浓度≥2μg/μL,无蛋白酶污染

需用温和裂解液,避免破坏蛋白复合物

细胞样本

2×107个

加温和裂解液后-80℃冷冻

蛋白复合物完整,无降解

裂解液含蛋白酶抑制剂,冰浴裂解30min

过表达细胞样本

5×106个

(转染后48h)

加裂解液后-80℃冷冻

过表达蛋白表达量高,无明显细胞毒性

转染效率≥50%,确保诱饵蛋白足量

动物组织样本

1g

(如小鼠肝脏)

液氮速冻后-80℃冷冻

组织新鲜,蛋白复合物未解离

取样后立即冷冻,避免复合物解离


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